Detèminasyon Kontni Asid Oksalik nan Fwi ak Legim pa Kromatografi Likid Pèfòmans Segondè (HPLC)

Detèminasyon nan Asid oksalik Kontni nan fwi ak legim pa kromatografi likid pèfòmans segondè (HPLC)
1. Prensip Eksperimantal ak Konsepsyon Metòd
Kòm yon asid òganik komen nan fwi ak legim, kontni asid oksalik la afekte dirèkteman gou ak valè nitrisyonèl manje a. Eksperyans sa a itilize kromatografi likid pèfòmans segondè faz envèse (RP-HPLC). Anba kondisyon faz mobil asid, asid oksalik la separe nan nivo liy debaz la ak sibstans ki entèfere yo lè l sèvi avèk yon kolòn kromatografik C18. Yo itilize yon detektè iltravyolèt ki mete a 210 nm pou analiz kantitatif, ki baze sou karakteristik absòpsyon UV gwoup karboksil yo nan molekil asid oksalik yo.
2. Koub Estanda ak Preparasyon Echantiyon
Yo itilize yon metòd dilisyon gradyan pou prepare solisyon estanda yo: peze avèk presizyon 25.0 mg asid oksalik diidrat epi dilye jiska 25 mL avèk dlo ultrapi pou jwenn yon solisyon stock 1 mg/mL. Yo dilye solisyon sa a youn apre lòt nan yon seri solisyon estanda a 50, 100, 200, 400, ak 800 µg/mL, avèk chak konsantrasyon enjekte an triplika.
Pou preparasyon echantiyon an, yo itilize ekstraksyon ak asistans mikwo ond: peze 5.00 g omojena fwi/legim, ajoute 10 mL solisyon asid idroklorik 0.1 mol/L, trete a 60°C ak mikwo ond pandan 10 minit, filtre nan yon filt manbràn 0.45 µm, epi kolekte filtrat la pou tès la.
3. Optimizasyon Kondisyon Kromatografik yo
Faz mobil lan se yon sistèm 0.01 mol/L potasyòm diidwojèn fosfat tampon (pH 2.5)–asetonitril (95:5), ak yon vitès koule 0.8 mL/min ak yon tanperati kolòn 35°C. Ajisteman pwopòsyon asetonitril la montre ke lè faz òganik la depase 10%, tan retansyon asid oksalik la diminye a mwens pase 3 minit, men pik la ap kontinye diminye. Nan kondisyon final optimize yo, tan retansyon asid oksalik la se 4.2 minit, sa ki reyalize yon separasyon konplè ak asid sitrik ak asid malik adjasan yo (rezolisyon > 1.5).
4. Validasyon Metòd
Verifikasyon ranje lineyè a montre yon bon relasyon lineyè ant zòn pik la ak konsantrasyon an nan ranje 10–1000 µg/mL (R² = 0.9993). Limit deteksyon an (LOD), detèmine pa metòd rapò siyal-sou-bri a, se 0.5 µg/mL. Nan tès repetabilite yo, RSD a pou sis detèminasyon repete nan menm echantiyon epina a se 1.8%. Eksperyans rekiperasyon pik nan twa nivo (80%, 100%, ak 120%) bay rekiperasyon mwayèn 98.2%, 102.4%, ak 97.8%, respektivman, satisfè egzijans pou analiz kantitatif.
5. Analiz echantiyon reyèl yo
Yo te teste sis fwi ak legim ki disponib nan komès: epina (356 ± 12 mg/100 g), seleri (215 ± 9 mg/100 g), tomat (18 ± 2 mg/100 g), pòm (6 ± 1 mg/100 g), bannann (pa detekte), ak bwokoli (89 ± 5 mg/100 g). Yon konparezon ak metòd estanda nasyonal la (GB 5009.277-2016) montre ke devyasyon relatif ant de metòd yo mwens pase 5%, sa ki verifye fyab metòd sa a. An patikilye, metòd HPLC a montre pi gwo sansiblite pase metòd titrasyon tradisyonèl yo lè y ap analize echantiyon ki gen ti kontni.
6. Nòt kle yo
Kontwole valè pH la byen pandan pretretman echantiyon an. Si pH ekstrè a depase 3, presipitasyon oksalat kalsyòm ap mennen nan rezilta tès ki ba. Faz mobil lan ta dwe prepare fre chak jou pou evite presipitasyon sèl ak blokaj kolòn. Apre chak 20 enjeksyon, rense kolòn nan ak asetonitril-dlo (30:70) pandan 30 minit pou anpeche degradasyon efikasite kolòn nan. Pou echantiyon ki gen pigman (pa egzanp, chou mov), li rekòmande pou ajoute yon etap pirifikasyon ekstraksyon faz solid anvan enjeksyon an.
7. Direksyon Aplikasyon ak Ekspansyon
Metòd sa a ka pwolonje pou deteksyon asid oksalik nan echantiyon byolojik tankou pipi ak san. Lè yo ajiste konpozisyon faz mobil lan (pa egzanp, ajoute idroksid tetrabutilammonium), yo ka detèmine asid oksalik ak metabolit li yo an menm tan. Lè yo konbine avèk yon detektè espektrometri mas, yo ka etabli yon metòd deteksyon tras ki pi presi. Nan endistri pwosesis manje a, metòd sa a ka bay sipò done enpòtan pou seleksyon varyete ki gen ti asid oksalik ak optimize pwosesis pou kwit manje yo.